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探討橙黃壺菌BL10脂肪酸延長酶和去飽和酶的功能

為了解決Alpina B5的問題，作者何孟諭 這樣論述：

除了 C22:6n-3 (DHA) 及 C22:5n-6 (n-6DPA) 兩種主要的高度不飽和脂肪酸 (Highly unsaturated fatty acids, HUFAs) 外，橙黃壺菌 BL10 還含有包括 C22:5n-3 (n-3DPA)、C20:5n-3 (EPA) 及 C20:4n-6 (ArA) 在內的次要 HUFAs。這些次要的 HUFAs 在 BL10 進行低密度培養時的含量會顯著增加，然而其生合成路徑及生物意義均不清楚。本研究的目的，即在嘗試釐清這些問題。首先在比較不同培養條件的差異時，發現這些次要的 HUFAs 容易在低碳氮比及搖晃培養等容易促進細胞分裂，而較不

利於油脂累積的培養條件中出現。再將 BL10 的基因體資料庫，經過基因搜尋及註解的結果，發現有 5 個疑似參與脂肪酸標準生合成路徑的基因： fads1、fads2、elovl1、elovl2和elovl3，能在其 putative proteins 中分別預測出 Δ-6 desaturase、ω-3 desaturase、Δ-9 elongase、C18-Δ-9 specific elongase 及 fatty acid elongase 的功能。進一步藉由前驅物添加實驗的做法探討 BL10 細胞內是否具有這些酵素的活性，由結果確認含有 Δ-6、Δ-5 兩種 desaturase 及 Δ-6

、Δ-5 兩種 elongase 的活性。進一步的分析，探究 EPA 及 ArA 是否可能來自 DHA 及 n-6DPA 的 retroconversion，結果證明 EPA 及 ArA 兩種次要的 HUFAs 應該是 DHA 及 n-6DPA 這兩種主要 HUFAs 的 retroconversion 產物。