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Ames測試法探討牛樟芝萃取物之致變異性與治癌性

為了解決hplc滯留時間的問題，作者湯凱鈴 這樣論述：

牛樟芝萃取物的生物活性範圍相當廣泛，從血管舒張到抑制癌症等。其富含許多治療癌症和其他調節免疫相關疾病之化合物，如醣類 (Polysaccharides)之外、三萜類 (Triterpene)、苯類 (Benzenes)等。牛樟芝萃取成分除治療效果之外，是否尚具毒性，為許多消費者關心之議題。因此人體食用之安全性問題乃受到重視，此為本研究重點之一。本研究使用四種牛樟芝萃取物，分別為1. 液態培養樟芝菌絲體2. 洋菜培養皿樟芝菌絲體3. 牛樟椴木培養樟芝菌絲體4. 牛樟椴木培養樟芝子實體，其培養天數為14日、1個月、6個月、3至5年。四種培養型態之牛樟芝萃取物以索氏萃取進行純化，並利用HPLC分析

其三萜類含量，其含量依序為牛樟椴木培養樟芝子實體＞牛樟椴木培養樟芝菌絲體＞洋菜培養皿樟芝菌絲體＞液態培養樟芝菌絲體，本實驗以Ames test利用鼠傷寒沙門氏菌之TA98和TA100菌株針對四種類型牛樟芝(Antrodia cinnamomea)萃取物進行安全性之致突變試驗測試，分別以代謝組(添加S9)與非代謝組(無添加S9)進行之。結果顯示該四種類型牛樟芝萃取物於試驗範圍(1- 1000 µg/plate)均不具致突變性，推估劑量試驗範圍內對生物體具安全性。本研究亦同時進行功能性抗致突變試驗，結果顯示，四種培養型式之牛樟芝於代謝組(添加S9)抗突變試驗均較非代謝組(無添加S9)抑制效果佳，顯

示牛樟芝萃取物經由代謝後更能發揮其抗突變效果，且隨著試驗劑量增高(1-1000 µg/plate)具有較好之抗突變效果，呈現劑量反應關係。針對鼠傷寒沙門氏菌框構位變異(Frame-shift mutation)菌種TA98之抗突變試驗中發現，三萜類含量最高之牛樟椴木培養樟芝子實體代謝組(添加S9)試驗中，低劑量(10-100 µg/plate)抑制效果與高劑量組(1000 µg/plate)效果差異不大，由於牛樟椴木培養樟芝子實體培養時間較常，所以10 µg/plate做為製劑開發之劑量較1000 µg/plate更具經濟效益。其中特別於鹽基置換變異 (Base-pair substituti

on) 菌種TA100對4-nitroquinoline N-oxide(4NQO)之抗突變試驗發現，具較高含量之化合物A(4,7-Dimethoxy-5-methyl-1,3-ben-zodioxole)之洋菜培養皿樟芝菌絲體萃取物抗突變試驗中，較三萜類含量較多之牛樟椴木培養樟芝子實體萃取物更具療效，且於低劑量組(1 µg/plate)相較於其他培養方式之抗突變效果高達32%，說明洋菜培養皿樟芝菌絲體萃取物比牛樟椴木培養樟芝子實體萃取物更具經濟價值。本實驗結果顯示四種不同培養型態之牛樟芝萃取物於試驗劑量範圍內(1- 1000 µg/plate)不具致突變反應且於代謝組(添加S9)具良好之抗突

變效果，而生物體具代謝之功能，依實驗結果推估如人體食用代謝後具有良好之抑制癌變效果，故牛樟芝萃取物具藥物製劑開發之潛力。

分離自台灣水域之五株新屬與新種細菌的鑑定分析

為了解決hplc滯留時間的問題，作者林凱柔 這樣論述：

本研究主要針對台灣本土的淡水與海水菌株進行分離與純化，並找出具有新種潛力的菌株進行分類與鑑定，分別採自台灣五個區域，並從中分離出219株菌，其中包含77株革蘭氏陽性菌，142株革蘭氏陰性菌，經由16S rRNA基因序列分析之初步鑑定後發現菌株MIB-4、Agd-32、Acr-12、Acr-14與K7具有成為新種(屬)細菌之潛力，因此進一步將這些菌株進行分類與鑑定的分析。菌株K7從台灣海域南海北部(N21° 25 ' E119° 28 ')所分離，屬於革蘭氏陰性菌之桿菌，具有運動性，具鞭毛，具莢膜，為好氧菌，顏色為黃色，經由16S rRNA基因序列分析，結果顯示與Aestuariibacter

屬具有最高相似度(95.04 %)，判定為具有新屬之潛力菌株。主要醌型為 Q8，G + C含量為46.43 mol %，主要的脂肪酸為Sum In Feature 3，極性脂肪由phosphatidylethanolamine (PE)、phosphatidylglycerol (PG)、phosphatidyl-monomethylethanolamine (PME)、uncharacterized phospholipid (PL)、uncharacterized aminophospholipids (APL1-APL2)、uncharacterized lipids (L1-L5)

所組成，由形態學分析、生理生化特性和遺傳特徵等實驗結果，證實菌株K7為新屬之細菌，並將其命名為Planktobacterium nanhaiensis。　　菌株MIB-4從南投縣鹿谷鄉內湖村的北勢溪(N23° 40 ' E120° 47 ' )所分離，屬於革蘭氏陰性菌之長桿菌，不具運動性，不具鞭毛，不具莢膜，好氧，菌落顏色為淡粉紅，經由16S rRNA基因序列分析，結果顯示與Flectobacillus屬具有最高相似度(98.24 %)。G + C含量為37.61 mol %，主要的脂肪酸為 C16:1 5c (28.38%)、C15:0 iso (14.61%)、Sum In Featur

e 3 (13.09%)，極性脂肪由phosphatidylethanolamine (PE)、uncharacterized aminophospholipids (APL1-APL5) uncharacterized phospholipid (PL1)、uncharacterized lipids (L1-L5) 所組成。由形態學分析、生理生化特性和遺傳特徵等實驗結果，證實菌株MIB-4為Flectobacillus屬中的一新種，命名為 Flectobacillus fontis。　　菌株Agd-32從高雄市燕巢區阿公店水庫(N22° 48 ' E120° 21 ' )所分離，屬於革蘭氏

陽性菌之桿菌，具運動性，具有鞭毛，產胞子，具莢膜，好氧。經由16S rRNA基因序列分析，結果顯示與Paenibacillus屬具有最高相似度(95.99 %)。G + C含量為59.53 mol %，主要的脂肪酸為 C15:0 anteiso、C16:0 ，極性脂肪由phosphatidylethanolamine (PE)、phosphatidylglycerol (PG)、diphosphatidylglycerol (DPG)、uncharacterized phospholipid (PL)、aminophosphoglycolipid (APGL)、glycolipid (GL)、

uncharacterized lipid (L) 所組成，由形態學分析、生理生化特性和遺傳特徵等實驗結果，證實菌株Agd-32為Paenibacillus屬中的一新種，命名為Paenibacillus lacus。　　菌株Acr-12與Acr-14從屏東縣恆春鎮墾丁(N21° 52 ' E120° 43 ' )鹿角珊瑚所分離，屬於革蘭氏陰性菌之桿菌，不具運動性，不具鞭毛，不產胞子，不具莢膜，好氧，顏色均為米色。經由16S rRNA基因序列分析，結果顯示均與Endozoicomonas屬具有最高相似度分別為97.77 %與96.72 %。G + C含量分別為49.64 mol %與49.09

mol %，主要的脂肪酸皆為Sum In Feature 3，極性脂肪由phosphatidylethanolamine (PE)、phosphatidylglycerol (PG)、diphosphatidylglycerol (DPG)、uncharacterized aminolipid (AL) 和uncharacterized phospholipid (PL) 所組成，由形態學分析、生理生化特性和遺傳特徵等實驗結果，證實菌株Acr-12與Acr-14皆為Endozoicomonas屬中的新種，將Acr-12命名為Endozoicomonas coralli，Acr-14命名為End

ozoicomonas acroprae。