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長葉紫菜混合寡醣製備及其生理活性之探討

為了解決鋸齒酵素功效的問題，作者蔡宛真 這樣論述：

本研究目的為探討長葉紫菜混合寡醣之生產條件與其抗氧化和美白生理活性之表現，並以人類結腸腺癌細胞 Caco-2 測試長葉紫菜混合寡醣於腸道中之吸收與運輸變化。將 2.5% 之長葉紫菜粉經過熱水萃之熱萃多醣液 (Porphyra dentata hot water extract polysaccharides, PD) 經 95%乙醇 1：6 (v/v) 沉澱後凍乾，將產物命名為長葉紫菜粗多醣 (Porphyra dentata crude polysaccharides, cPPS) 。將 1% 長葉紫菜粗多醣溶液加入MA103 及 MAEF108 菌株之誘導酵素液於 20-40oC 下水解

48 h ，結果顯示，於 40oC 下反應有最佳效果，還原糖濃度從 0.40 增加至 1.31 mg/mL，增加量顯著高於其他水解溫度。水解液經超過濾系統 (Ultrafiltration, UF) 區分出小於 3 kDa 分子量之區分液後，將區分液以高效能液相層析 (High performance liquid chromatography, HPLC) 分析可知，長葉紫菜混合寡醣內含約為 2,510、2,215、611 及 259 Da 之寡醣分子。經由薄層色層分析後，可觀察到長葉紫菜混合寡醣內有聚合度為 DP 2 至 DP 6 之寡醣分子。經傅立葉紅外線光譜 (Fourier tra

nsform infrared spectroscopy, FT-IR) 分析 PD、cPPS 及 POS，由圖譜分析之結果可見 3 者之官能基相似，皆具有 C-H 基團 (2979 cm-1)、O-H 基團 (3420-3428 cm-1) 及硫酸 (Sulfate group) 基團 (1352-1412 cm-1) 之伸縮震動訊號。PD、cPPS 及 POS 於本實驗製程中產率分別為 19.87%、13.66% 及 12.14% ；而硫酸基含量分別為：31.20%、31.14% 及 28.61%。濃度 50 mg/mL 之PD、cPPS 及 POS 總酚含量分別約為 577.64 、 4

1.93 、 151.19 g/mL。使用濃度 10 mg/mL 之 POS ，清除 DPPH 自由基效果為 14.77% ；還原力約相當於 90.28 g/mL 之 Trolox；對螯合亞鐵離子之效率達 91.92% ；對酪胺酸酶 (Tyrosinase) 酵素活性抑制率為 13.8% ；對小鼠黑色素瘤細胞之生長抑制率為 13.8%；使用 1 mg/mL 之 POS 對 Caco-2 細胞不具毒性，存活率約為 100%，可供後續實驗參照。本製程所得之 POS 於 TLC、HPLC 、粒徑及表面電位分析結果證實為聚合度 DP 2 至 DP 6 且 ＜ 3 kDa 之長葉紫菜混合寡醣，其表面

帶負電荷且平均顆粒粒徑約為 566 nm，具有良好的螯合亞鐵離子能力。

臺灣蜆脂溶性機能成分之鑑定、影響因素及對人肝細胞氧化壓力之功效

為了解決鋸齒酵素功效的問題，作者古璦寧 這樣論述：

市售蜆製品表列之品管指標為肝醣與胺基酸等水溶性物質，均非蜆之內因性特異成分，蜆粉係生蜆經熱水萃取後，再取殘肉乾燥磨粉而成，故分析蜆粉之脂溶性成分，探討肥源、培育季節、蛋白核小球藻 (Chlorella pyrenoidosa)、鋸齒單針藻 (Monoraphidium caribeum Hindak)、四尾柵藻 (Scenedesmus quadricanda)、梅尼小環藻 (Cyclotella meneghiniana)、混合藻種或非藻類配方養殖蜆，製成蜆粉與其脂溶性成分之關係，再鑑定蜆粉脂溶性成分之種類、含量及加工方式造成成分之差異，以供管控市售蜆錠品質，並確定蜆粉脂溶性粗萃物對肝細胞

氧化壓力之影響。取九批次蜆粉 (dry powder, d.p.) 之脂溶性成分，其固醇類之 GC-EI-MS 和 GC-FID 圖譜均相似。以 campesterol (0.88 mg/g d.p.) 含量最高，其次為 brassicasterol (0.69 mg/g d.p.)、stigmasterol (0.47 mg/g d.p.) 及 β-sitosterol (0.17 mg/g d.p.)，總植物固醇含量達 2.21 mg/g d.p.，植物固醇/膽固醇比值為 1.31；脂溶性色素含量為 113.97 μg/g d.p.，以葉綠素 a 含量高於葉綠素 b、c1+c2、d 及類胡

蔔素；脂肪酸以 SFA (saturated fatty acids) 為主 (27.40 mg/g d.p.)，次之為 PUFA (polyunsaturated fatty acids) 及 MUFA (monounsaturated fatty acids) 其含量分別為 12.45 mg/g d.p. 和 11.81 mg/g d.p.，總脂肪酸含量為 51.64 mg/g d.p.，PUFA n3/n6 比值為 2.15。夏季以豬、鴨和魚肥育藻供蜆濾食，產出蜆粉之固醇類、脂溶性色素和脂肪酸皆顯著 (p&;lt;0.05) 高於冬季；蜆粉經蛋白酶水解後，游離態固醇類和色素增加，但脂肪酸

無顯著差異。蜆池分離出六種淡水微藻，經 GC-EI-MS 鑑定，共有 18 種固醇類，微藻之總植物固醇含量依序為 C. pyrenoidosa (3159 μg/g d.p.)、M. caribeum Hindak (1883 μg/g d.p.)、P. duplex (1708 μg/g d.p.)、S. acuminatus Meyen (1529 μg/g d.p.)、C. meneghiniana (1477 μg/g d.p.) 及 S. quadricanda (1456.51 μg/g d.p.)；脂溶性色素、脂肪酸含量以金藻門 C. meneghiniana 顯著 (p&;lt

;0.05) 高於其他藻種，其葉綠素 a (10.83 mg/g d.p.)、葉綠素 c1+c2 (4.42 mg/g d.p.)、葉綠素 d (0.29 mg/g d.p.)、總色素 (18.82 mg/g d.p.)、MUFA (51.16 mg/g d.p.)、PUFA n3/n6 (1.91) 及 UFA/SFA 比值 (1.74) 皆顯著 (p&;lt;0.05) 高於其他藻種，但不含類胡蘿蔔素。以單一藻種、混合藻種或非藻類配方育蜆，所製成蜆粉之固醇種類皆相同，但含量不同，以 C. meneghiniana 養殖蜆，可提高蜆粉之植物固醇/膽固醇比值 (2.1) 和脂肪酸 n3/n6

(1.50) 比例。以蜆粉之植物固醇、植物固醇/膽固醇比值、總葉綠素、類胡蘿蔔素、PUFA 及其 n3/n6 比值繪製成雷達圖，評估四種市售蜆錠之摻偽情形。品牌 A 之脂溶性成分均顯著 (p&;lt;0.05) 高於其他三種市售蜆錠，並與蜆粉之雷達圖類似，可供品管蜆粉原料參考。將蜆粉脂溶性粗萃物區分為富含固醇類 (sterol rich clam lipid extract, SCE) 和脂肪酸 (fatty acid rich clam lipid extract, FCE)，於細胞培養液中添加 1.25 - 10 μg/mL SCE 或 FCE，可顯著 (p&;lt;0.05) 增加 He

pG2 細胞受酒精、過氧化氫損傷之存活率，降低細胞一氧化氮、超氧陰離子和過氧化氫產量，並有濃度依存性，亦不會促使胞外脂質過氧化。以 10 μg/mL SCE 或 FCE 對 HepG2 細胞之保護作用顯著 (p&;lt;0.05) 高於 1.25 - 5 μg/mL SCE 或 FCE，使氧化壓力指標均相當於或低於控制組。本研究建議可藉由培育特定藻相養殖蜆，製成蜆粉後，以蛋白酶水解，增加蜆粉脂溶性機能成分，並可以其脂溶性組成作為評估蜆粉品質之指標。